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金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性

生物學(xué)特性：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，直徑0.4～1.2μm，呈葡萄串狀排列；無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞；在陳舊培養物中，衰老的菌體常轉為革蘭氏陰性。兼性厭氧菌，最適生長(cháng)溫度37°C，最適生長(cháng)pH7.4；耐鹽性強，可產(chǎn)黃色色素。

流行學(xué)特征：金黃色葡萄球菌是常見(jiàn)的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。金黃色葡萄球菌在適當的條件下，能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒。近幾年，金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒報道層出不窮，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的 25%左右，金黃色葡萄球菌成為僅次于沙門(mén)氏菌和副溶血桿菌的第三大微生物致病菌。

金黃色葡萄球菌的檢驗

第一法：定性檢驗

操作注意事項

1：使用均質(zhì)袋進(jìn)行前增菌時(shí)，應使用帶有底托的均質(zhì)袋架子，防止培養過(guò)程中前增菌袋子歪倒泄漏污染培養箱；
2：高壓滅菌后，培養基中瓊脂往往會(huì )分層在底部，應搖勻使用；
3：金黃色葡萄球菌在血平板上大部分為金黃色，但有時(shí)為白色色，形態(tài)鑒定時(shí)需注意；
4：如果BP平板在培養48小時(shí)后未見(jiàn)金黃色葡萄球菌可疑菌落，應挑取非典型菌落進(jìn)行鑒定；
5：金黃色葡萄球菌在BP平板上有時(shí)可見(jiàn)到不分解脂肪的菌株，除每一偶不透明圈和清晰帶外，其他外觀(guān)基本相同。此外，從長(cháng)期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落，其黑色常較典型菌落淺些，其外觀(guān)可能較粗糙，質(zhì)地較干燥。形態(tài)鑒定時(shí)需特別注意；
6：培養箱中疊放培養皿時(shí)，為防止中間平皿過(guò)熱，高度不得超過(guò)6個(gè)平板；

第二法：平板計數法	第三法：MPN法

操作注意事項

1：在進(jìn)行樣本10倍稀釋的過(guò)程中，吸管應插入檢樣稀釋液液面2.5cm以下，取液應先高于1mL，而后將吸管尖端貼于試管內壁調整至1mL，這樣操作不會(huì )有過(guò)多的液體粘附于試管外。而后將1mL液體加入另一9mL試管內時(shí)應沿管壁加入，不要觸及管內稀釋液晶，以防吸管外部粘附的液體混入其中影響實(shí)驗結果。

培養基原理解析

1、7.5%氯化鈉肉湯

? 蛋白胨和牛肉膏粉提供碳源、氮源、維生素和礦物質(zhì)；較高含量的氯化鈉提供較高的滲透壓，抑制大多數非葡萄球菌的微生物。

2、Baird-Parker瓊脂
? 胰蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供碳氮源、維生素和生長(cháng)因子；丙酮酸鈉和甘氨酸刺激葡萄球菌的生長(cháng)；氯化鋰和亞碲酸鉀抑制非葡萄球菌的微生物；含有卵磷脂酶的葡萄球菌降解卵黃使菌落產(chǎn)生透明圈，而脂酶作用則產(chǎn)生不透明的沉淀環(huán)；凝固酶陽(yáng)性的葡萄球菌還能還原亞碲酸鉀而產(chǎn)生黑色菌落。
? 金黃色葡萄球菌在 Baird-Parker平板上呈圓形, 表面光滑、 凸起、 濕潤、 菌落直徑為2 mm~3 mm,顏色呈灰黑色至黑色, 有光澤, 常有淺色(非白色) 的邊緣, 周?chē)@以不透明圈( 沉淀) , 其外常有一清晰帶。

金黃色葡萄球菌菌落黑色，周?chē)哂胁煌该魅?，其外有清晰?/span>

3、金黃色葡萄球菌顯色培養基
? 原理：顯色劑與金黃色葡萄球菌具有的酶發(fā)生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在無(wú)色透明平板上，金黃色葡萄球菌產(chǎn)生粉紅－紫紅的邊緣整齊菌落；抑菌劑可抑制雜菌的生長(cháng)。
? 特點(diǎn)：使用方便，加熱煮溶即可不需高壓滅菌；結果顏色清楚，結果一目了然。

4、BHI肉湯
? 胰蛋白質(zhì)胨和牛心浸出液提供氮源、維生素和生長(cháng)因子；葡萄糖可為多種細菌提供能源；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸氫二鈉為緩沖劑。

5、血平板
? 酪蛋白胰酶消化物、心胰酶消化物、肉胃酶消化物、酵母浸出粉、可溶性淀粉提供碳氮源、維生素和生長(cháng)因子；羊血是細菌生長(cháng)繁殖的良好營(yíng)養物質(zhì)。在45～50℃的基礎培養基中加入血液可以保存血液中某些不耐熱的生長(cháng)因子，同時(shí)血球不被破壞。
? 金黃色葡萄球菌菌落為金黃色，菌落周?chē)梢?jiàn)完全透明溶血圈。

 金黃色葡萄球菌黃色或白色菌落，有完全透明溶血圈

HandyPlate 金黃色葡萄球菌測試片

金黃色葡萄球菌測試片與3M方法擬合度良好	金黃色葡萄球菌測試片 金黃色葡萄球菌顯品 - 紫紅色菌落

生化鑒定原理解析

1、血漿凝固酶試驗
? 致病性的金葡菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉變?yōu)槔w蛋白，附著(zhù)于細菌表面，產(chǎn)生凝固。
? 如呈現凝固（即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，判定為陽(yáng)性結果。
? 必須注意，某些菌株在產(chǎn)生的葡激酶在延長(cháng)孵育時(shí)間后可使凝塊溶解使之產(chǎn)生假陰性。

金黃色葡萄球菌實(shí)時(shí)熒光PCR快檢法

金黃色葡萄球菌實(shí)時(shí)熒光PCR擴增試劑盒

? 技術(shù)原理：基于實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對檢測目標特異性基因片段設計引物和熒光探針并優(yōu)化反應所需試劑組分，加入待檢樣品核酸即可進(jìn)行擴增反應。在擴增過(guò)程中，熒光探針與目的基因片段結合，可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號，此時(shí)熒光定量PCR儀可識別該熒光信號，同時(shí)根據其強弱變化繪制出相應的實(shí)時(shí)擴增曲線(xiàn)，進(jìn)而判定目標基因是否檢出。
? 產(chǎn)品優(yōu)勢：快速提取，一步法核酸提取，快速高效，核酸提取效率高；操作簡(jiǎn)單，提供PCR反應體系預混液，直接加樣檢測，無(wú)需自行配制；特異性強，采用高特異性引物及探針，確保實(shí)驗準確性；靈敏度高，采用高效的擴增酶，檢測靈敏度可達10-100copies/test。
? 產(chǎn)品組成：

質(zhì)量控制及疑難解析

質(zhì)量控制

1、實(shí)驗室過(guò)程中，每批預增菌液、選擇性增菌液、分離平板等都要做空白對照。以掌握檢驗過(guò)程中是否存在來(lái)自檢驗環(huán)境的污染。

2、定期使用金黃色葡萄球菌ATCC6538或相應定量活菌參考品，在P2實(shí)驗室或陽(yáng)性對照實(shí)驗室內，用適當的食品樣品進(jìn)行陽(yáng)性實(shí)驗驗證，污染劑量應控制在10-100CFU/25g，并進(jìn)行記錄，驗證實(shí)驗至少每2個(gè)月進(jìn)行1次。

3、每2個(gè)月將所使用的培養基和生化試劑用金黃色葡萄球菌的標準菌株或陰性菌株進(jìn)行驗證，并進(jìn)行記錄。

疑難解析

問(wèn)：在增菌增菌結束后，肉湯未見(jiàn)微生物生長(cháng)，是否可以終止實(shí)驗？
答：不可以，因為肉湯可見(jiàn)的細菌濃度為10⁷CFU/ml，在此濃度一下，肉眼不能發(fā)現微生物生長(cháng)，但實(shí)際溶液中有微生物生長(cháng)。

問(wèn)：金黃色葡萄球菌溶血屬于哪種類(lèi)型?
答：細菌溶血的類(lèi)型可分為三種，ɑ溶血，β溶血和γ溶血。γ溶血即為不溶血， ɑ溶血和β溶血都出現溶血現象，但區別在于ɑ溶血環(huán)中的紅細胞未完全溶解，而β溶血環(huán)中的紅細胞完全溶解，因此會(huì )出現透明的溶血環(huán)，金黃色葡萄球菌引起的溶血屬于β溶血。 

所需培養基試劑

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